单细胞免疫组库测序服务

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免疫组库(immune repertoire,IR) 是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。传统的免疫组库研究技术通常是用多重PCR技术或5’RACE扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR3区),再结合高通量测序技术实现,但往往只能检测TCR和BCR一条链的序列信息。2015年,10× Genomics发布了基于微流控和油滴包裹技术的Chromium单细胞系统平台,可实现高通量的单细胞转录组和单细胞V(D)J测序。不但可以将TCR/BCR双链完美匹配,而且可以细化到单细胞水平,同时获得表达谱信息。


技术原理

10X Genomic单细胞免疫组库测序是建立在GemCode技术上的微流体平台,将带有条形码和引物的凝胶珠与单个细胞包裹在油滴中;接下来在每个油滴内,凝胶珠溶解,细胞裂解释放mRNA,通过逆转录产生用于测序的带条形码的cDNA。液体油层破坏后,cDNA一分为二,后续同时进行基因表达和免疫组库文库构建;其中TCR或者BCR的V(D)J序列通过设计在TCR或者BCR、lg的C区域的巢式PCR引物进行富集。然后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据,实现在单细胞水平同时对基因表达和免疫组库进行研究。

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V(D)J重组产生TCR/BCR多样性图


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10× Genomics单细胞免疫组库实验原理图


技术优势

  1. 分析数百至数万个淋巴细胞,以检测罕见的全长V(D)J转录物和细胞类型亚群;

  2. 同时测量来自相同单细胞的配对的TCRα/β和BCR重链/轻链信息和基因表达,精确的H链和L链的组合、α链和β链的组合,性价比更高;

  3. 使用直观的软件工具显示免疫库的克隆性,多样性和细胞环境;


应用方向

  1. 探索肿瘤免疫微环境,辅助免疫治疗

  2. 探索自身免疫性疾病和炎症性疾病发生机制,辅助疫苗的研究

  3. 移植和免疫重建


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