RNA pull-down是研究细胞内RNA与蛋白或与RNA结合情况的技术。通过将RNA进行标记(生物素探针),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-蛋白质复合物,之后再分离复合物得到蛋白质/RNA。通过western blot或mass Spectrometry检测蛋白质,通过定量PCR或高通量测序来鉴定与其相互作用的RNA分子。
从RNA探针制备到下游检测,全流程标准化管控
目标RNA体外转录
生物素探针标记
链霉亲和素磁珠
富集标记RNA
细胞裂解液共孵育
形成RNA-蛋白复合物
洗涤非特异性结合
洗脱结合蛋白
SDS-PAGE分离
银染检测富集效果
Western Blot验证
质谱鉴定蛋白
富集效率高、验证体系完善、下游方案灵活
基于生物素-链霉亲和素高亲和力体系,可高效富集低丰度目的蛋白-RNA复合物,显著提升检测灵敏度。
RNA pull-down以RNA为钓饵富集蛋白,RIP以蛋白为钓饵富集RNA,两种技术可互为验证,确保互作关系的可靠性。
支持多种下游检测方式:Western Blot靶向验证、质谱无偏筛选、qPCR及高通量测序检测互作RNA,灵活适配不同研究需求。
从质谱数据质控到互作网络分析,提供系统化生物信息分析
原始数据质控、蛋白鉴定与定量、肽段匹配质量评估
实验组与对照组差异蛋白统计、火山图与热图展示
GO生物过程/分子功能/细胞组分、KEGG通路富集分析
基于STRING等数据库构建PPI网络,筛选hub蛋白
整合RNA与蛋白组数据,构建RNA-蛋白互作调控网络
* 具体分析内容可根据研究需求灵活调整,详询技术顾问
细胞或组织样本,专业技术人员全程指导样本准备
| 样本类型 | 推荐起始量 | 保存与运输 | 注意事项 |
|---|---|---|---|
| 细胞样本 | > 1 × 108 个细胞 | -80℃ 保存,干冰运输 | 收集细胞后PBS洗涤,离心弃上清,细胞沉淀迅速液氮速冻后转-80℃保存;避免反复冻融 |
| 组织样本 | > 500 mg | -80℃ 保存,干冰运输 | 新鲜组织取材后立即液氮速冻,-80℃保存;避免组织降解,送样前确认样本质量 |
* 样本量不足或特殊样本请咨询技术顾问,送样前建议先进行样本质量评估
完整实验报告与分析结果,数据详尽可追溯
* 项目周期视项目而定,受样本数量、检测方案及分析内容等因素影响
根据研究目的与检测需求,选择合适的服务方案
适用于已知候选蛋白的靶向验证研究,通过Western Blot检测特定蛋白与RNA的结合。
适用于无偏筛选RNA结合蛋白,通过质谱技术全面鉴定与目标RNA互作的蛋白谱。
针对复杂研究需求,提供RNA-蛋白互作关联分析、多组学整合分析等定制化服务。
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