免疫组库 全长V(D)J TCR/BCR 链配对

BD Rhapsody™ 单细胞 TCR/BCR 免疫组库测序
全长 V(D)J 序列解析

基于 BD Rhapsody™ 微孔阵列 + 磁珠捕获平台,在单细胞水平实现 T 细胞受体(TCR)和 B 细胞受体(BCR)的全长 V(D)J 序列解析。利用 5' 端捕获策略 + 5' RACE 扩增技术,获得包含 CDR1、CDR2、CDR3 及框架区的完整可变区序列,而非仅 CDR3 片段。支持 TCR 单独、BCR 单独或 TCR+BCR 联合检测三种模式。

BD Rhapsody™ Single Cell
Cell Barcode + UMI
微孔+磁珠双捕获
核心优势

为什么选择 BD Rhapsody™ 平台

微孔物理分隔技术带来低多细胞率、高捕获效率和稳定的数据质量

全长V(D)J解析

覆盖CDR1/CDR2/CDR3及全部框架区,信息量远超仅CDR3检测

低多细胞率

微孔物理分隔,多细胞率 < 1%,链配对准确性更高

灵活选择

支持TCR单独、BCR单独、或TCR+BCR联合检测

高配对率

T细胞α-β链配对率 > 70%,B细胞重轻链配对率 > 65%

TCR含γδ链

同时检测αβ和γδ T细胞,覆盖更全面的T细胞群体

可扩展多组学

可叠加WTA全转录组、AbSeq蛋白组等模块

技术流程

标准实验流程,稳定可靠的数据产出

从样本制备到生信分析,全流程标准化质控,确保实验结果的稳定性与可重复性

1

单细胞悬液制备与质检

细胞悬液制备、活性检测

2

单细胞捕获

微孔+磁珠,5'端捕获TCR/BCR mRNA

3

细胞裂解与杂交

mRNA与磁珠特异性探针结合

4

逆转录与5'RACE扩增

合成cDNA并扩增全长可变区

5

TCR/BCR文库构建

免疫组库文库构建与质检

6

VDJ组装与分析

VDJ组装与免疫组库生信分析

检测内容对比

TCR与BCR全长V(D)J解析

覆盖CDR1/CDR2/CDR3及全部框架区,提供远超CDR3-only检测的丰富信息

类型 检测链 覆盖区域 主要输出信息
TCR TRA(α链)、TRB(β链)、TRG(γ链)、TRD(δ链) 全长可变区 V(D)J CDR1/CDR2/CDR3序列、V/D/J基因取用、链配对、克隆多样性
BCR IGH(重链)、IGK(κ轻链)、IGL(λ轻链) 全长可变区 V(D)J + 恒定区 CDR1/CDR2/CDR3序列、抗体亚型、SHM分析、克隆谱系树
样本要求

样本准备指南

规范的样本制备是高质量单细胞数据的基础,请在送样前参考以下要求

项目 要求
样本类型 PBMC、新鲜组织解离细胞、培养细胞、分选富集的T/B细胞
细胞总量 ≥ 1×10⁵ 个活细胞(建议2×10⁵ ~ 1×10⁶)
细胞活率 ≥ 80%(低于70%需提前沟通)
细胞大小 ≤ 30 μm
目标细胞比例 目标T/B细胞占比建议≥ 10%,过低建议先富集
保存运输 新鲜样本4℃运输24h内到达;或冻存细胞干冰运输,避免反复冻融
生信分析内容

全面的生信分析方案

从标准分析到高级分析,提供多维度的单细胞数据挖掘与可视化服务

标准分析

全长VDJ序列组装与CDR1/CDR2/CDR3识别注释
V/D/J基因比对(IMGT数据库)
克隆型鉴定与克隆频率分布
α-β / γ-δ链配对分析
克隆多样性分析(Shannon、Simpson、Gini指数等)
V/J基因取用偏好性分析
CDR3长度分布与氨基酸组成分析
克隆扩增分级与Top克隆展示
组间比较(差异克隆型、共享克隆型)

高级分析(可选)

抗原特异性预测(TCRex、GLIPH2等算法)
系统发育树构建
趋同克隆型鉴定
HLA分型推断
应用场景

广泛的研究应用方向

适用于生命科学研究的多个领域,助力高水平科研成果产出

肿瘤免疫研究

TIL克隆扩增、免疫治疗应答、新抗原特异性T细胞发现

抗体发现与开发

抗原特异性B细胞序列挖掘、中和抗体筛选

自身免疫病研究

自身反应性T/B细胞克隆鉴定、疾病活动期克隆动态

感染与疫苗研究

抗原特异T/B细胞动态追踪、疫苗免疫组库评估

移植与细胞治疗

免疫重建监测、CAR-T克隆持久性、GVHD相关克隆

推荐测序量

TCR ≥ 5,000 reads/cell;BCR ≥ 5,000 reads/cell

高通量测序平台,PE150

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常见问题

FAQ 常见问题解答

关于产品和实验的常见问题,更多问题请联系技术支持

Q TCR/BCR 测序和 bulk 免疫组库测序有什么区别?
A

Bulk 免疫组库只能获得群体水平的克隆频率分布,无法获得链配对信息;单细胞 TCR/BCR 测序在单个细胞水平检测,可以获得 α-β 或重-轻链的准确配对,对于抗体发现、抗原特异性研究至关重要。

Q 为什么选择 BD 平台做单细胞 VDJ?
A

BD Rhapsody 采用微孔物理分隔技术,多细胞率更低;支持全长 V(D)J 解析(不仅 CDR3);TCR 同时覆盖 αβ 和 γδ 链;并可灵活叠加转录组、蛋白组等多组学模块。

Q 样本中 T/B 细胞比例很低可以做吗?
A

建议目标细胞占比 ≥ 10%。如果比例过低,建议先通过免疫磁珠或流式分选富集目标细胞,以提高数据有效率和性价比。

05 单细胞VDJ测序对样本有什么要求?
单细胞VDJ测序要求样本为T细胞或B细胞富集的样本,如PBMC、淋巴结、脾细胞等。细胞活性要求不低于80%,细胞总量建议不少于1×10^6个,细胞浓度在500至1000 cells/μL之间。如果是TCR分析,建议样本中T细胞比例较高;如果是BCR分析,建议B细胞比例较高。送样前建议咨询技术团队评估样本适用性。
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